试管婴儿技术,作为辅助生殖技术的重要组成部分,自20世纪末以来在全球范围内得到广泛应用。在国内,随着生殖医学的进步,试管婴儿技术也经历了从一代到三代的演变。对于许多不孕不育家庭来说,理解这些技术的不同之处及其对双胎妊娠的可能性有着重要的意义。
一般来说,细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。既可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,又起到了细胞保种的作用。而冷冻细胞有以下两种方法:
1、传统方法:
放好胚胎的冷存管置于4℃10分钟、-20 ℃30分钟、-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)、液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
2、程序降温:
利用已设定程序的等速降温机以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
细胞冻存是将细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存的一种技术,添加冷冻保护剂可以很好的改善细胞的破坏与死亡情况。细胞在不加任何保护剂的情况下冷冻,细胞内外的水分会很快形成水晶从而引发一系列的不良反应:首先,部分蛋白质因局部电解质浓度增高和pH值改变而变性,导致细胞内部空间结构发生改变。其次,细胞内冰晶的形成和细胞膜系统上蛋白质,酶的变性等会限碍细胞的能量代谢。再次,胞膜上的类脂蛋白复合体在冷冻中易发生破坏引起胞膜通透性的改变,使细胞内容物丧失。最后,随着冷冻温度的降低,冰晶体积膨胀造成DNA的空间结构发生损伤从而引起细胞死亡。
降调成功的标准有卵泡、子宫内膜标准和体内激素水平的指标标准,彩超监测卵泡如果发现体内有多个直径小于5毫米的卵泡且大小接近相等。子宫内膜的厚度在5毫米以下,抽血监测体内激素水平,促黄体激素在10mIU/ml以下、促卵泡激素小于10mIU/ml,符合以上标准时说明降调成功,降调成功是试管婴儿非常关键的一项,使用的药物是促性腺激素释放激素类似物。目的就是在一个月经周期促进多个卵泡发育成熟,可以一次取多个卵泡,可以在体外培育多个胚胎,从而在多个胚胎中选择质量好的胚胎进行试管移植,可以有效的提高试管婴儿移植成功率。
总之,试管降调不成功,并不代表试管一定会失败。当然,试管降调不成功,有可能是由于放置胚胎或着女性身体原因。